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凝聚胺法与微柱凝聚法检测不规则抗体的对比

2021.5.27
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

临床输血安全保障日益受到重视,随着试剂及技术的改进,过去因血型鉴定灵敏度方面的误差所引起的严重输血反应已鲜有报道。人类红细胞有29个血型系统,不规则抗体在正常人群中检出率为0.3%-2%。抗体筛查是输血前常规检查,其目的是保障输血安全。采用一种灵敏度高,特异性好,结果准确的检测方法对患者输血前或者供血者常规抗体筛选,借以发现有临床意义的不规则抗体,对临床安全输血具有重要的意义。

抗体筛检可以发现有意义的不规则抗体,保证患者用血安全,避免因血型不合引起的输血反应。早期的盐水法因只能筛查出IgM抗体早已淘汰,目前应用于临床的方法主要是凝聚胺法、微柱凝聚法、抗人球蛋白法等。红细胞不规则抗体筛选的经典方法为抗人球蛋白法,但由于此方法操作复杂,技术要求高,因此在临床的开展曾一度受到限制;凝聚胺法由于操作简单方便,目前成为国内开展红细胞不规则抗体筛选的常用方法。近年来发展起来的微柱凝胶技术(MGT)是在经典的抗人球蛋白试验基础上发展起来的新型检测方法,已被广泛应用于血型鉴定、交叉配血及不规则抗体筛查。

一、凝聚胺法

凝聚胺(polymatching)法首先利用低离子介质降低溶液的离子强度,减少红细胞周围的阳离子云,促进血清(浆)中的抗体与红细胞相应抗原结合,再加入带亚电荷的高价阳离子多聚物-凝聚胺溶液,中和红细胞表面的负电荷,缩短细胞间距,形成可逆的非特异性聚集,并使IgG型抗体直接凝集红细胞。加入中和液后,仅由凝聚胺引起的非特异性聚集,会因电荷中和而分散,而由抗体介导的特异性凝集则不会分散。凝聚胺是一种抗肝素药物,所以对于含肝素的血液标本要稍稍多加一些凝聚胺来中和肝素。有研究报道,凝聚胺法对Kell系统的抗体检出不理想,所以阴性结果要转入抗人球蛋白试验,以免漏检。K的抗原频率约为7%,由于K抗原具有较强的免疫原性,所以欧美国家都将Kell作为输血前血型检测的必检项目。中国人群中,Kell血型一直被认为多态性较单一,基本都为K,且K的频率约为0.07%,因此输血前不进行K抗原的定型。

二、微柱凝胶技术

微柱凝胶技术作为一项免疫学检测技术,是凝胶过滤技术和抗原抗体反应的结合,已在欧美等发达国家作为常规性检测技术应用于临床,由于凝胶颗粒具有分子筛作用,抗原抗体反应后的红细胞通过离心经过微柱,无IgG结合的红细胞穿过凝胶到达底部,而红细胞上若有IgG抗体结合则会被凝胶中的抗IgG拉住,红细胞被阻止在凝胶柱上层或中间。

微柱凝胶系统采用凝胶过滤技术和离心技术及抗原抗体反应,凝集的红细胞不能通过凝胶间隙而留在凝胶的上层呈阳性反应,而未凝集的红细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管的底部呈阴性反应。

三、凝聚胺法与微柱凝聚法对比

由于有些抗体存在剂量效应关系,筛选细胞可用纯合子细胞。传统的方法通常采用间接抗人球蛋白实验,费时费力,工作量大。由输血产生的免疫性抗体,以Rh抗体为最多,各抗体频率的多少主要取决于抗原的免疫原性及其在人群中的分布频率。一般说,抗原的免疫原性越大,产生抗体的机会越多。

微柱凝胶法与凝聚胺法相比:

1、微柱凝胶法比凝聚胺法检测受血者免疫性不规则抗体灵敏度高,结果更准确。对抗体含量低的弱抗体,往往凝聚胺试验阴性时,微柱凝胶法仍可检出。其灵敏度较凝聚胺法高1-5个滴度,比传统试管法要高出2-7个滴度。

2、标准抗血清与对应筛选红细胞在微柱凝胶卡中的凝集强度较凝聚胺法强。

3、凝聚胺法结果稳定可靠容易判断,标本用量少、易标准化,适用于临床常规不规则抗体筛检。

4、微凝胶免疫检测法结果稳定,重复性好,技术容易掌握,尤其是不同人员的操作结果一致,避免人为因素的影响。

5、微凝胶免疫检测法孵育、离心时间较长,而且价格较贵(是凝聚胺试验的5倍),也是推广应用较慢的原因。

对ABO血型的误判,也不能通过抗体筛查纠正查出。因此即使不规则抗体筛查阴性,还必须用能快速检测出不完全抗体的方法交叉配血,以确保输血万无一失。微柱凝胶技术可以有效预防ABO以外抗体引起溶血性输血反应的发生。

可见,微柱凝胶法灵敏度更高,效价较低的抗体也可检测到。凝聚胺因效价因素漏检国内也曾有文献报道,另外,凝聚胺法也受人为操作因素影响,如加试剂量、离心机控制、振荡观察等等都会带来人为的误差而漏检。相对而言,微柱凝胶法的反应卡操作易掌握、结果稳定、受人为因素的影响小,已成为输血检查的推荐方法。综上所述,不规则抗体的筛选对于临床输血安全非常重要,通过比较凝聚胺和微柱凝聚法两种方法都基本能一致地对输血前有效把关,对于软硬件条件较好的大医院,选用微柱凝聚法是最好的选择,而对于基层医院或者急诊需要,凝聚胺法以其简便快速准确、成本低等方面的优点也可推广使用。


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