耐药细胞的特性和操作要点有哪些

　耐药细胞的特性：

　　1)细胞来源于人正常口腔黏膜组织。

　　2)细胞鉴定：Vimentin免疫荧光染色为阳性。

　　3)经鉴定细胞纯度高于90%。

　　4)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

　　5)细胞生长方式：不规则细胞，长梭形，贴壁培养。

　　耐药细胞的操作要点：

　　1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

　　2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内完全解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

　　3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

　　4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

　　5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

　　6）产品仅用于科研观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。