M15化学感受态细胞操作方法看似简单,细节很重要

　M15化学感受态细胞是采用大肠杆菌M15菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。它能表达lac阻遏蛋白，抑制T5强启动子的表达。同时，pREP4还

　　赋予宿主菌株卡那霉素抗性。pREP4是从pACYC改造而来的，含有p15A复制子。它能够与所有带ColE1复制起点的质粒共存。

　　主要特点

　　使用pUC19质粒检测，转化效率可达108，-80℃保存几个月转化效率不发生改变。

　　recA1和endA1突变阻止对克隆DNA的修饰或对宿主菌染色DNA的重组，提高纯化

　　质粒的产量和质量。

　　M15化学感受态细胞操作方法

　　1、取100μl冰上融化的M15感受态细胞，加入目的DNA并用指尖轻轻敲打管底混匀(避免用枪吸打)，冰上静置25分钟。

　　2、42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

　　3、向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基（2YT或LB），混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

　　4、5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

　　5、将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

　　M15感受态细胞感受态细胞使用注意事项

　　1、感受态细胞一般在冰上融化。

　　2、混入目的DNA时应轻柔操作。