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全血细胞培养染色体技术常用试剂配制

2021.6.02
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空空

好好工作,天天开心

 (一)培养液

    (1)RPMI1640培养液:称取RPMI培养基9.8g,碳酸氢钠1.9g、青霉素100u/ml,加双蒸水至1000ml,调节 pH7.2~7.4无菌过滤冻存备用。

    (2)小牛血清商品

    (3)植物凝集素(PHA)

    (4)pH调整液:5% NaHCO3溶液高压灭菌(8磅15min),0.1N稀盐酸液100ml。

    (5)秋水仙素:10mg/ml无菌过滤高压灭菌(8磅10min)。

    (6)磷酸缓冲液:pH7.4。

    磷酸氢二钠28.8g(H2O)、磷酸二氢钾2.67g(无水),溶于1000ml双蒸水中,加肝素,终浓度为100u/ml。

    (7)Giemsa染色液:

    Giemsa粉剂 1g

    甘油 66ml

    在研钵中,加入少量甘油油仔细研磨然后放甘油全部加磨,60℃温箱中保温2h,冷却后加入甲醇66ml。装入有色瓶中混合待用。染色时用pH7.4磷酸缓冲液稀释10倍,随配随用。

    (二)固定液

    (1)甲酸:冰乙酸3:1混合即用。

    (2)PBS缓冲液配制:

    NaCl 16g Na2HPO4(12H2O) 5.65g

    KCl 0.4g KH2PO4 0.4g

    加双蒸水至1000ml pH7.0。

    取5%胰酶(生理盐水配制)1ml加入50ml PBS液中(终浓度为0.025%),4℃冰箱待用。

    二、细胞培养(Bhatl B和McGee JOD,1990)

    1.完全培养基

    RPMI 76.0ml

    胎牛血清 20.0ml

    植物凝集素 2.0ml

    抗生素/抗菌素溶液(100




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