一：关系到沉淀出现的几率！
记得吗？血清在融化过程中，瓶子里冰块的底部你会看见亮亮的蛋白丝在下沉，如同蜂蜜溶于水时的亮线，这就是血清中大量的蛋白在快速融化，而水的熔点高于蛋白，融化的速度是比蛋白慢的。
（回想一下高级冰淇淋和大棒冰的区别，你懂得！）
试想，如果采用4℃过夜的方法，1瓶500毫升的血清融化好，大约需要10小时左右，蛋白先融化，沉降在瓶子的底部，水融化的速度比蛋白慢，于是造成大量蛋白溶于少量的水，此时就很容易有一些蛋白饱和析出，（大多是脂蛋白和纤连蛋白），这就是血清融化中产生沉淀的重要原因之一。
采用三步法，只要2.5个小时，温和有效地加快了水融化的速度，另一方面，融化过程中可以间断轻轻摇摆瓶子，让蛋白在瓶中混匀。此方法不但节约了时间，而且大限度减少了血清沉淀出现的几率。
血清融化过程中，蛋白质会比水先融化。冰块底部亮亮的细丝就是融化中的蛋白
其二：血清在培养细胞中，重要的是利用它的活性的因子，因此，融化过程中大限度地保留因子的活性，就变得非常重要。回忆一下，细胞复苏时，要保持细胞的活性，我们是要遵循“快融”原则还是“慢融”原则呢？快融！血清同样如此！三步法需要两个半小时，4℃过夜需要大约10个小时（冰箱一般设2-8℃，所以各实验室融化时间会稍有出入）。哪个速度对保留活性更好？不言而喻！
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