裸鼠皮下荷瘤的实验步骤

细胞准备

1.     不同的细胞成瘤能力不同，在选择时应根据实验目的和具体情况综合考虑。如乳腺癌细胞系MCF-7虽然经常用于体外实验，但成瘤虑差，生长慢，因此一般不考虑。

2.     一般分为鼠源的和人源的细胞系，鼠源的一般更容易成瘤，但人源的更贴近人类肿瘤生长情况。

3.     取冻存于液氮的肿瘤细胞复苏并扩增，确保肿瘤细胞的活力和较好的生长状态。一般鼠源肿瘤细胞接种2-100万/只，人源的细胞系需要200-1000万/只以上。可结合细胞和裸鼠的实际情况，最高可以注射1000万/0.1ml，不可再高，因为细胞几乎达到饱和状态。

注意计算好细胞用量，一般要多准备5只裸鼠左右细胞用量。

裸鼠准备

一般选择5-6w龄的裸鼠，太小死亡率太高，太大免疫力会增强，不易成瘤。如无特殊要求雌雄均可。

接种步骤

1.     胰酶消化细胞，计数后将其重悬于生理盐水中

2.     选择进针部位（一般选择腋下或腹股沟等血管丰富的部位），用酒精棉球擦拭进针部位

3.     向前方穿行，注射前针头左右动一下，若无阻力则证明在皮下，否则可能在皮内或肌肉里面

4.     缓慢推注，一般体积为100-150μL，注射完后缓慢拔出针头，可在注射部位看到明显的鼓包

5.     接种点离进针点尽量远一些，防止漏液和污染

结果处理

一般接种5天后即可看到肿瘤出现，根据实验要去的生长天数，达到时间后颈椎脱臼处死裸鼠，取出肿瘤，拍照。拍照时需要放置两把直尺，可用于后期计算肿瘤体积。