流式细胞术数据分析知识汇总（四）

门（Gata）设置：指在某一张选定参数的直方图上，根据该图的细胞群分布选定其中想要分析的特定细胞群，并要求该样本所有其他参数组合的直方图只体现这群细胞的分布情况。

1、测肿瘤细胞表面PD-L1的表达水平，活细胞获取

2、检测肿瘤细胞表面PD-L1的表达水平

关于A/W/H的说明：

1）信号检测时，每一个细胞通过激光，机器的探头都会检测到一个荧光信号，在内部产生一个电脉冲信号（波），这个信号机器记录为一个峰值，每一个峰值都有三个参数，高度（H），宽度（W）和曲线下面积（A），H 和W都是直接测出的，而A是根据机器的设置就算得出。

2）临床和科研中使用A的时候比较多，特别在DNA倍体测定时一定要使用A，此外做荧光分辨率、荧光灵敏度等性能测试时也使用A。不过临床应用中的一些实验也显示，使用H时具有更高的CV和分离度，对于弱荧光细胞的辨识是有优势的，因此选用H也是可以的。

看图技巧：

1、先看横、纵坐标，了解检测目的；

2、看图形分布，直方图峰型越往右移，代表其荧光强度越强；

3、M1的确定是根据阴性对照细胞的基础荧光域值设定的，峰形右移，荧光信号大于基础荧光域值（M1），表示阳性（M2）；

4、数据统计时，检测目的物一般用各Marker区内的细胞所占百分比或者用平均荧光强度表示；

5、几个直方图的比较，关键看Mark（M1,M2）的位置以及细胞数。

比较不同细胞中PD-L1的表达水平。