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1.引物设计不够优化。应避免引物二聚体和发夹结构的出现。2.引物浓度不佳。适当降低引物的浓度,并注意上下游引物的浓度配比。3.镁离子浓度过高。适当降低镁离子浓度,或选择更合适的mix试剂盒。4.模板有基因组的污染。RNA提取过程中避免DNA的引入,或通过引物设计避免非特异扩增。