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第一、样本本身含有高盐。第二、积层胶长度不足，一般样品1-2cm足矣。但是如果样本含有高盐可以考虑将积层胶加长到4cm左右。第三、缓冲液需要更换。使用多次的Buffer缓冲能力会大打折扣，如果样品珍贵难得推荐用新鲜配制电泳缓冲液，反之用3次就丢弃吧！第四、上样量有关。dxylark已经叙述。第五、电压不要太高，一般60-80V跑完积层胶后再将电压提高。如果感觉不放心就低压4度电泳，效果还可以。第六、确保分离胶底部的气泡排光，如果有气泡将会影响电泳。
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