组织总蛋白提取原理

关键词：脑组织 目的：熟练进行脑组织蛋白质的提取 背景知识：无 原理：无 具体内容： 脑组织总蛋白质提取方法 1．将低温保存的样本称重。 2．加入裂解液。样本与组织比例=1：3~3.5 w/v，一般为150~170mg：500μl。加入50×Cocktail蛋白酶抑制剂。可利用振荡器、加样器，将组织块吹散。 3．液氮中冻融3~4次。1min/time，室温中自然融化。 4．超声破碎。将含裂解液的EP tube埋入冰中，超声3~4sec/time，强度为最大强度的3/4。间隔10几sec。至溶液透明。小心空泡效应。 5．加入Dnase I，Rnase A。10μg/μl，5μl。4℃ 30min。 6．4℃ 14000g/min 离心25~30mins。 7．提上清，分装。保存。 细胞裂解液 Tris （40mM） 24.2mg 48.4 mg 96.8mg 尿素(urea) (7M) 2.102g 4.204g 8.408g 硫脲（thiourea） (2M) 0.761g 1.522g 3.044g 4% CHAPS 0.2g 0.4g 0.8g 1%二硫苏糖醇(DTT) 0.05g 0.1g 0.2g 乙二胺四乙酸二钠 1.86mg 3.72mg 7.44mg (EDTA) (1mM) 加去离子水至 5 ml 10 ml 20 ml