影响荧光分光光度法定量测定的主要因素

影响荧光分光光度法定量测定的主要因素

1．激发光照射

有一些荧光物质若受到强光照射，会发生分解而导致F↓。所以，荧光分光光度计通常在激发光单色器后装配有光闸，在测定时才打开光闸让激发光照射样品池。

2．温度

温度↑，荧光效率下降，F↓。因为，温度↑，增加分子间碰撞机会而使能量消耗掉。

3．pH值

pH值能改变某些荧光物质的电子构型从而影响荧光强度。

4．溶剂

有些溶剂会使荧光效率下降，也可能带来干扰荧光。

荧光分光光度法基本原理：

由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出荧光，荧光经过滤过和反射后，被光电倍增管所接受，然后以图或数字的形式显示出来。

物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态, 这些处于激发态的分子是不稳定的,在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出，从而产生荧光．

不同物质由于分子结构的不同,其激发态能级的分布具有各自不同的特征，这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱；因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地进行物质的鉴定。

在溶液中，当荧光物质的浓度较低时,其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系,即IF=KC,利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析,与紫外-可见分光光度法类似，荧光分析通常也采用标准曲线法进行。