（1）原理
沙门氏菌抗原的检测是基于用特异性单克隆抗体进行的酶免疫分析（EIA）用抗沙门氏菌抗原的单克隆抗体包被于聚苯乙烯微量小孔的内表面，将样品和对照加入中。样品中如有沙门氏菌抗原存在，则将被吸附在孔上的特异性抗体吸收。冲洗小孔后，加入接合剂与被抗体吸收的沙门氏菌抗原结合。再冲洗小孔，除去未结合的接合剂，然后再加入酶底物。当用终止液终止反应时，出现的蓝色则转变为黄色。样品中是否有沙门氏菌抗原取决于该颜色产生的光密度。
（2）仪器
①微量条板架 能放置1～8个微量条板的聚苯乙烯框架。
②条板密封纸 覆盖微量板的粘合纸。
③内嵌式包装物 （用于固定放置试剂）。
④培养箱 能于35.0℃±0.1℃～37.0℃±0.1℃恒温。
⑤水浴箱
a.能于42.0℃±0.5℃和35.0℃±1.0℃恒温。
b.能于100.0℃±0.1℃恒温。（注意:也可用100℃的高压灭菌器或流动蒸汽发生器代替。）
⑥手动或自动 EIA 冲洗系统 系统设计为冲洗12×8微量板的被包被的小孔。包括用于吸小孔内容物的真空泵和用于将冲洗液注入各小孔的分装系统。
⑦EIA 板读数器 具有450nm 滤光片的光度计，能读出微量板的数据。
⑧微量移液器 能精确地移放50～20μL 液体的单管或多管的移液器。一次性的微量吸嘴。
⑨贮液槽 多管移液器用的试剂储存槽用于容纳分装到微量板孔内的 EIA 试剂。
⑩取孔穴的工具，没有包被的小孔黑环标记。
（3）试剂
①包被抗体的微量条板 聚苯乙烯微量条板，每个条板包含用沙门氏菌的单克隆抗体包被的12个孔。于2～8℃贮存。
②对照抗原
a.阳性对照 加热灭活冻干的圣地亚哥沙门氏菌（可与沙门氏菌抗体反应）。
b.阴性对照 冻干的1％脱脂奶粉（不与沙门氏菌抗体反应）。
两种对照均以0.1mg/mL 硫酸艮他霉素作为防腐剂。
③接合剂与接合剂稀释液 与过氧化物酶接合的沙门氏菌抗体用含有蛋白质稳定剂和抗生素的pH7.6的 Tris 缓冲液稀释，2～8℃储存可保持稳定12个月。
④TMB 过氧化物酶底物（溶液 A） 含有0.4g/L 3，3'5，5'-四甲联苯胺的专用的有机试剂。
⑤TMB 过氧化物酶底物（溶液 B） 含有0.02％过氧化氢的枸橼酸缓冲液。
⑥25倍浓缩的冲洗液 19.25％HC1，1.25％吐温-20、0.525％KH2PO4 和1.825％的K2HPO4 水溶液。
⑦终止液1mol/L 硫酸（当心:避免与皮肤接触，一旦接触，用水彻底冲洗接触部位）。
⑧MN 肉汤（加有10ug/mL 新生霉素的 M 肉汤） 5.0g 酵母浸膏，12.5g 胰蛋白胨2.0g D-甘露糖，5.0g 枸橼酸钠，5.0g NaCl，5.0g KH2PO4，0.14g MnCl2，0.8g MgSO4，0.04g FeSO4 和0.75g 吐温-80混悬各成分于1LH2O 中，加热至煮沸1～2min，分装于16mm×125mm 带螺旋帽的试管中，每管9mL。旋松试管帽，于121℃ 高压灭菌15min。制备新生霉素贮备液（100ug/mL水溶液）并过滤除菌。以无菌操作，于每一灭菌的 MN 肉汤管中加1.0mL 新生霉素溶液。新生霉素贮备液可贮存于-70℃，但解冻后，不可再次冷冻。
⑨诊断试剂（用于鉴定 EIA 检测阳性的培养物）。（注:常规方法所需试剂）
（4）通则
一次检验必须用同一批号试剂盒内的物料。不要使用超过有效期的物料。为防止条板冷凝，打开前将箔包放于室温（20～25℃）。微量板上的小孔是可以移动的取出需要量的小孔，在分离需要的小孔时仅可接触小孔的边缘，并将其稳固地置于条板上。
将未使用的小孔和条板放回含有硅胶剂的箔包内，将自封扣关闭。2～8℃ 储存可达2个月。试剂在使用后置2～8℃ 保存。
免疫分析无需在无菌条件下进行。
开始试验前，将各组分和测试样品放于室温（20～25℃）。每一样品及试剂均使用单独的吸嘴以避免交叉污染。如果用塑料槽分装接合剂和酶底物，务必始终将它们分开使用。当不用时，将所有的组分贮存于2～8℃。
不要重复使用微量孔。
（5）样品制备
①前增菌 在非抑制性肉汤中进行前增菌，促使沙门氏菌开始生长。所用方法随样品而异，应按 AOAC 967.26A（常规方法）或现行版的细菌学分析手册进行。但下列样品除外。
a.生的或严重污染的样品 以无菌操作称取25g 样品放入灭菌的打碎杯内，加入225mL 灭菌的乳糖肉汤，高速（约20000r/min）打碎2min，盖严杯盖并于室温下静置60min。摇匀，用试纸测定 pH 值，如必要时用灭菌的1mol/LNaOH 或 HCl 调节 pH 值为6.8±0.2。在测定最终 pH 值前，盖严杯盖并混匀。以无菌操作，将每杯中的内容物移入灭菌的带螺旋盖的500mL 广口瓶中。旋松瓶盖1/4圈，于35℃ 培养24h±2h。
b.经加工的食品样品 将前增菌肉汤于35℃培养18～24h。
②选择性增菌 分别转种1mL 经前增菌的培养液于亚硒酸盐肉汤，需将亚硒酸盐肉汤预热至42℃，并于42.0℃±0.5℃水浴中培养6～8h；生的或严重污染食品的选择性增菌必须培养18～24h。
③后增菌 从培养箱中取出选择性肉汤，用手或涡旋混合器混匀。从四硫磺酸盐管中移取1.0mL转种于预热在42.0℃±0.5℃水浴中的 MN 肉汤的管中。从亚硒酸盐胱氨酸肉汤管中移取1.0mL 转种于另一支预热的 N 肉汤管中。除生的或严重污染的样品外，所有食品均应于42.0℃±0.5℃水浴中培养 MN 肉汤14～18h，并于42.0℃±0.5℃（四硫磺酸盐肉汤）或35℃（亚硒酸盐胱氨酸肉汤）将选择性增菌肉汤继续培养14～18h。对于生的或严重污染的样品，以它们各自的培养温度，将选择性增菌肉汤继续培养6h。
④用于 EIA 分析的样品制备——从培养箱中取出 MN 肉汤管，用手或涡旋混合器将其混匀。从每一 MN 肉汤管中移取0.5mL混合于一清洁的带螺旋帽的试管中，在沸水浴或在流动蒸汽中加热20min。于2～8℃ 贮存③剩余的 MN、四硫磺酸盐和亚硒酸盐胱氨酸肉汤管，以便对任何阳性样品培养物进行确证。EIA 分析前，将加热的 MN 肉汤冷却至25～37℃。
（6）酶免疫检测 开始分析前，应准备好下列试剂。
①1倍冲洗液的制备 稀释20mL 25倍冲洗浓缩液于480mLH2O中。
②对照抗原 加2mL 无菌 H2O 于阴性对照瓶中，加1mL 无菌 H2O 于阳性对照瓶中混匀。加水复原的抗原在2～8℃贮存可稳定60天。
从箔袋中取出所需数量的小孔（每个食品样品1个孔和3个对照孔）。将小孔固定在条板托中。移取0.1mL经加热处理过的 MN 肉汤样品放入单独的孔中。移取0.1mL 阴性对照液，放入2个小孔中；移取0.1mL 阳性对照液，放入1个小孔中。
用条板密封纸将板封上，于37℃培养30min。
培养后，从每个孔中吸出内容物并加0.2～0.3mL 1倍冲洗液于每一小孔中，重复此步骤2次。吸出最后的冲洗液。如果用自动冲洗器而平板没有填满，用没有包被的小孔填充空位。
吸移0.1mL 酶接合剂于每一孔中，封板，于37℃培养30min。
吸出并用0.2～0.3mL 1倍冲洗液冲洗每孔6次，吸出最后的冲洗液前，在玻璃试管中等量混合 TMB 溶液 A 和 TMB 溶液 B。吸移0.1mL TMB 酶底物于每一小孔中，于室温（20～25℃）培养30min 加0.1mL 终止液于每一小孔中。按（7）在10～15min 内读条板。（7）读数在读数器上选用450nm 波长。以空气做零点（无条板托盘和条板）读取每一孔中溶液的吸收值 A，计算阴性对照孔 A 的平均值（应为＜0.30），阳性对照的 A 必须为0.70。对照的 A 必须在此范围内，检测则有效。用阴性对照 A 的平均值加0.25计算临界值。若样品 A 大于或等于临界值则推定为阳性，若样品 A 小于临界值则推定为阴性。（8）EIA 阳性样品的确认 EIA 读数阳性则表明可能存有沙门氏菌。由于抗体可与少数其他细菌交叉反应，故应按传统检验方法从四硫磺酸盐肉汤，亚硒酸盐胱氨酸肉汤和混合的MN 肉汤管中蘸取培养物在 Hektoen 肠道（HE），木糖赖氨酸去氧胆酸（XLD）和亚硫酸铋（BS）琼脂平板上划线分离进行养物的确证。典型或可疑菌落必须按传统培养方法进行生化和血清学鉴定。
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