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使用 CTAB 法时,操作需要注意的问题

2021.11.19
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zhaoqisun

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(1)最好使用幼嫩的材料,材料含水量大时,可用70%乙醇擦拭,蒸馏水稍冲洗后用滤纸吸干,于液氮中研磨。如果材料量大(20g以上),或所用的植物材料较老,或材料含有较多的酚类物质,应提高β-巯基乙醇的用量。

(2)氯仿抽提时,要保证抽提液中有一定的盐浓度,否则 DNA 进入沉淀。

(3)CTAB 溶液在15℃以下会沉淀,因此离心和其他操作时不可在低温下进行。

(4)加入沉淀缓冲液应在高于15℃的室温下沉淀,如果室温适宜,沉淀时间足够而无沉淀出现,可能是盐浓度高,这时可再加入沉淀缓冲液降低盐浓度。离心收集 CTAB 沉淀缓冲液沉淀的 DNA 时,不能离心过度,高速度及长时间的离心都会使沉淀过紧,而再溶解困难。

(5)采用真空抽干沉淀时,不能抽得太干抽得太干会使 DNA 断裂,也可不采用真空抽干,将离心管置通风柜或超净工作台中令乙醇自然蒸干,这样对 DNA 造成的损伤小。

(6)10%的 CTAB 溶液很粘滞,取液时可将其加热至56℃。

(7)转移 DNA 溶液用的枪头要剪去尖,避免对 DNA 的机械损伤。

(8)所得 DNA 应为白色或灰白色,若呈褐色则有多酚物质污染。对于含多酚类物质多的材料,提取缓冲液中可加入1%的 PVP。对于多糖含量高的材料,提取液中 CTAB 的浓度可增至3%或更高。


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