乙型肝炎病毒耐药基因检测方法

　　1.PCR产物直接测序：是将HBV基因组的逆转录酶区进行扩增后直接进行测序分析的方法。PCR产物直接测序法可检测已知和可能的未知耐药变异位点，是最常用的基因型耐药检测方法之一。PCR产物直接测序的方法一般作为基因型耐药检测的金标准。该方法的缺点是灵敏性较差，只有当变异株超过HBV准种池的20%时才能被发现。

　　2.聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)：该方法具有较强的灵敏性，可检测数量占HBV准种池5%的耐药变异株。但是PCR-RFLP只能检测已知、单一位点的变异，对于少数耐药变异位点监测不失为一种简便、快速且廉价的方法。但随着多种核苷（酸）类似物的相继问世和HBV耐药变异位点的不断出现，该方法将难以胜任多位点变异的检测。

　　3.反向杂交法：基于该技术的INNO-LiPA方法在国外已获准应用于临床检测，目前INNO-LiPA HBV DR v3 可检测包括拉米夫定(LAM)、替比夫定(LdT)、恩替卡韦(ETV)与阿德福韦酯(ADV)常见耐药位点。该法可检测变异株占HBV准种池5% ~ 10%的样品，故敏感性较好，但其同样只能检测已知位点变异。

　　4.实时荧光PCR：该方法操作简便，可检测变异发生率低于10%的耐药变异。仅能检测已知位点。

　　5.基因芯片：亦称DNA芯片、DNA微阵列，可检测已知变异位点。

　　6.限制性片段质谱多态性技术：该技术是将PCR-RFLP技术与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术结合，灵敏度高，能够发现数量不足HBV准种池1%的变异株，但其同样仅能检测已知位点变异，且价格昂贵，很难在临床推广应用。