偶氮苯和苏丹Ⅲ由于极性不同，利用薄层色谱(TLC)可以将二者分离。
(1)点样。
取两块制好的薄层板，分别在距一端1 cm处用铅笔轻轻画一条横线作为起始线。取管口平整的毛细管插入样品溶液[6]中，在一块板的起点上点1%偶氮苯的甲苯溶液和混合液两个样点。在第二块板的起点线上点1% 苏丹Ⅲ 的甲苯溶液和混合液两个样点，样点间相距1~1.5 cm。如果样点的颜色较浅，可重复点样。重复点样前，必须待前次样点干燥后进行。样点直径不应超过2 mm。
(2)展开。
用6：1(体积比)的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，待样点干燥后，小心放入已加入展开剂的广口瓶中进行展开。瓶的内壁贴一张环绕周长约4/5的滤纸，下面浸入展开剂中，以使容器内被展开剂蒸气饱和。点样一端应浸入展开剂0.5 cm。盖好瓶塞，观察展开剂前沿上升至离板的上端1 cm处取出，尽快用铅笔在展开剂上升的前沿处画一记号，晾干后观察分离的情况，比较二者 Rf 值的大小。
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