1、实验前准备
试验所用的器皿须经处理，去除可能存在的外源性内毒素。耐热器皿用干热灭菌法（250℃、30min）去除；塑料器具置30%双氧水中浸泡4h，再用无热原水冲洗后于60℃烘干。
2、鲎试剂灵敏度复核
当使用新批号的鲎试剂或实验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验。
（1）取内毒素工作标准品一支，用75%酒精棉擦拭安瓿颈，开启，开启过程应防止玻璃屑落入瓶内。
（2）向内毒素工作标准品安瓿内加入1ml内毒素检查用水，在漩涡混合器上混匀15min，制成10EU/ml的内毒素标准溶液。
（3）根据鲎试剂灵敏度标识值λ=0.015EU/ml，用内毒素检查用水将10EU/ml内毒素标准溶液稀释成2λ、λ、0.5λ、0.25λ四种浓度的内毒素标准溶液。
（4）取0.1ml/支的鲎试剂原安瓿18支，其中16支分别加入0.1ml不同浓度的内毒素标准溶液，每个内毒素浓度平行做4支；另外两只各加入0.1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照。
(5) 将各瓶中溶液轻轻混匀后，封闭瓶口，垂直放入37℃±1℃的恒温器中，孵育60min±2min。
(6) 将安瓿从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转180°。若管内形成凝胶并且凝胶不变形、不从管壁脱落者为阳性；未形成凝胶或形成的凝胶不坚实、变形并从管壁脱落者为阴性。记录结果。
（7）结果判定。当最大浓度2λ管均为阳性，最低浓度0.25λ均为阴性，阴性对照管为阴性，试验方法有效。按下式就算反应终点浓度的几何平均值即为鲎试剂灵敏度的测定值λc。
λc=lg-1(∑X/n）
式中： X为反应终点浓度的对数值（lg)。反应终点浓度，指系列递减的内毒素浓度中最后一个呈阳性的浓度。n=4（每个浓度的平行管数）。
当λc在0.5～2λ（包括0.5λ和2λ）时，判定该批鲎试剂可用于细菌内毒素检测，并以标示灵敏度为该批试剂的灵敏度。
3、样品检测
（1）供试品数量：每批产品从首、中、尾箱分别抽取3件。
（2）合格标准：产品细菌内毒素含量＜0.25EU/件。
（3）供试液制备
i、将预热至37±1℃的细菌内毒素检查用水10-15ml注入待检产品内，在受控室温（18℃-25℃）下浸提1h，在浸提过程中辅以晃动。供试液贮存时间不超过2h。
ii、当使用的鲎试剂灵敏度标示值λ小于供试品的内毒素限量时，按下式计算，用细菌内毒素检查用水将供试液稀释后进行检查：
供试液稀释倍数=cL/λ
式中：L为供试品的细菌内毒素限值，C为供试液浓度；当L以EU/ml表示时，c=1.0ml/ml。λ为鲎试剂的标示灵敏度。
4、检测：
i、取0.1ml/支的鲎试剂原安瓿15支，其中：
① 供试液管：9支，各加入0.1ml供试液；
② 供试品阳性对照管：2支，各加入0.1ml浓度为λ即0.015EU/ml的内毒素供试液溶液（用供试液稀释）；
③ 阳性对照管：2支，各加入0.1ml浓度为λ即0.015EU/ml的内毒素标准溶液（用检查用水水稀释）；
④ 阴性对照管：2支，各加入0.1ml内毒素检查用水；
将各瓶中溶液轻轻混匀后，封闭瓶口，垂直放入37℃±1℃的恒温器中，孵育60min±2min。
ii、将安瓿从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转180°。若管内形成凝胶并且凝胶不变形、不从管壁脱落者为阳性；未形成凝胶或形成的凝胶不坚实、变形并从管壁脱落者为阴性。记录结果。
5、结果判定
i、若阴性对照管均为阴性，阳性对照管均为阳性，供试品阳性对照管均为阳性，判定试验有效。
ii、若供试液管均为阴性，判定供试品符合规定。
iii、若供试液管均为阳性，判定供试品不符合规定。
iV、若供试液出现阳性和阴性管，需进行复试。复试时供试液管需做4支平行管，若所有平行管均为阴性，判定供试品符合规定，否则判定供试品不合格。
首页
