1. 在无菌的0.5ml或0.2ml离心管中按下列操作程序加样：
反应物 加样顺序 体积(μl) 终浓度
去离子水 1 29.4
10×Buffer B 2 5 1×
4×dNTP混合物 3 5 各200μmol/L
MgCl2 4 3 1.5mmol/L
有义引物 5 2.6 0.25μmol/L
反义引物 6 2.6 0.25μmol/L
模板 7 2 0.1μg
TaqDNA聚合酶 8 0.4 1unit
2. 用微量可调加样器和一次性Tip向每一管中加50μl矿物油。每加一管换一次Tip。
3. 振荡每只管，然后短暂离心。
4. 将管放到预热的热循环中，按下列程序开始循环：
预变性 94℃ 4分钟 1次
变性 94℃ 1分钟
退火 37-65℃ 1分钟
延伸 72℃ 1分钟
循环30次
终延伸 72℃ 7分钟 1次
保存 4℃
5. 将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，分析结果。电泳条件：60-80V,15-20分钟。
6. 紫外分析仪检查电泳结果。
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