(1)流动相控制pH需更加严格(±0.1个单位或者更高)
(2)添加离子对试剂的检测建议使用210nm以上
(3)添加离子对试剂的流动相平衡较慢
因离子对试剂在色谱柱的吸附和解析附过程非常缓慢,通常新的流动相需要进行几个小时的冲洗才能够达到完全平衡,有条件的可以进行过夜平衡12小时以上,否则在进样过程中化合物保留时间会慢慢的偏移。因此使用离子对试剂时不建议使用梯度洗脱方式。
(4)更换离子对试剂
当需要进行更换离子对试剂时,需要先把原来的离子对试剂进行洗脱下来,再用新的流动相进行平衡。一般烷基磺酸盐可以使用50%-80%的甲醇-水进行洗脱;季铵盐需要使用50%甲醇-缓冲液(pH4-5的100mmol/L的磷酸二氢钾)。要求至少使用等于柱体积的20倍进行冲洗色谱柱,再用新的流动相进行平衡色谱柱。
因此对于已用于 IPC 分离的色谱柱不要用于展开不含 IPC 试剂的 RPC 分离;从一种离子对试剂变为另外一种使用同一根色谱柱是可以的。
(5)容易出现伪峰
随行需要进样空白进行比较去除伪峰,当使用不纯的离子对试剂会较容易产生伪峰,此时建议更换使用不同批次或者来源的离子对试剂。