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核苷可从水解核酸来制备。用吡啶水溶液、氧化铝或酶促水解核糖核酸RNA，可得到核糖核苷；
用氧化铝或酶水解脱氧核糖核酸DNA可得到脱氧核糖核苷。
核苷也可用化学方法合成。
适当保护的核糖或脱氧核糖与碱基衍生物缩合，可得到相应的核糖核苷和脱氧核糖核苷。
或在糖的C1上先形成碳－氮和碳－碳键，然后闭环成杂环碱基而得到核苷。
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