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怎么利用吸光度算多糖提取率

2022.4.05
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超级艾蛋木啊

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怎么利用吸光度算多糖提取率?首先做一个葡萄糖标准曲线,把回归方程用excel做出来,网上百度有做回归方程的步骤,将你测出来的多糖吸光度代入回归方程,注意吸光度是y值,求出x值就是你想要的多糖含量,一定不要把单位搞混,做后再换算成你所用香菇总量中的含糖量。多糖提取实验设计流程
食用菌多糖的提取方法有水提法、碱提法和酶提法等,其中酶提法是利用酶对细胞结构的破坏作用,使存在于细胞内部的多糖释放出来,从而提高了多糖的得率。

本次实验采用纤维素酶和果胶酶对紫蘑菇进行水解,研究香菇多糖的最佳提取工艺,并探讨蘑菇粒度、蘑菇溶解方法以及酶法提取中多糖提取效果的评价方法。

可以同步做三组对比试验:⑴采用水提,不加酶;⑵采用酶法提取;⑶采用酶空白(只加酶,不加蘑菇粉)。

由于酶中也含有少量的糖类成分,其存在将会对蘑菇多糖的提取产生影响。因此,在计算酶法提取多糖的效果时,要减去酶本身所引入的糖。在确定最佳酶浓度时更要考虑。

一、实验流程:蘑菇干燥→粉碎过筛→加水浸泡0.5h→调PH→加入纤维素酶→提取→离心过滤→测多糖提取率

式中: n一提取液稀释倍数;

C一提取液中多糖的浓度(mg/mL);

V一提取液体积(mL);

m一蘑菇的质量(mg) 。

测定时取三个平行样,结果数据为平行样的平均数值。

二、具体实验步骤:

1、多糖标准曲线的绘制

精密称取105℃干燥恒重的葡萄糖标准品100mg,置于100 mL容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀。精密吸取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4、2.8 mL分别置于50 mL容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀。精密吸取上述各种溶液2.0 mL,分别加入5%苯酚溶液1.0 mL,摇匀,迅速加入5.0 mL浓硫酸,振摇5min,置沸水浴上加热15 min,然后置冷水浴中冷却30 min,随行空白,在490 nm波长处测定吸光度。以标准溶液浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标绘制标准曲线,并计算其标准曲线回归方程。

(1)精密度试验:精密吸取1.0 ml供试液按“标准曲线的制备”项下操作,分别测定吸光度,求得RSD。

(2)重现性及多糖含量测定:精密称取巴西蘑菇多糖0.1000g,按“供试液的配制”和“标准曲线的制备”项下操作,分别测定吸光度,求得多糖的平均含量,及RSD值

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