问题 | 原因 | 解决方案 |
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①出现“微笑”形带(两边翘起中间凹下) | 由于凝胶的中间部分凝固不均匀所致,多出现于较厚的凝胶中 | 待其充分凝固再作后续实验 |
②出现“皱眉”形带(两边向下中间鼓起) | 主要出现在蛋白质垂直电泳槽中,一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净 | 可在两板间加入适量缓冲液,以排除气泡 |
③带出现拖尾 | 样品融解效果不佳或分离胶浓度过大引起 | 加样前离心;选择适当的样品缓冲液,加适量样品促溶剂;电泳缓冲液时间过长,重新配制;降低凝胶浓度 |
④带出现纹理现象 | 主要是样品不溶性颗粒引起的 | 加样前离心;加适量样品促溶剂 |
⑤溴酚蓝不能起到指示作用,即遇到溴酚蓝已跑出板底,但蛋白质却还未跑下来的现象 | 主要与缓冲液和分离胶的浓度有关 | 更换正确pH的缓冲液;降低分离胶的浓度 |
⑥电泳的条带很粗 | 蛋白质样品未浓缩好 | 适当增加浓缩胶的长度;保证浓缩胶贮液的pH正确(6.7);适当降低电压 |
⑦蛋白带过宽 | 加样过多或泄漏 | 适当减少上样量 |
⑧电泳电压很高而电流却很低 | 这种现象一般初学者易出现。比如电压50v以上,可电流却在5mA以下。主要是由于电泳槽没有正确装配,电流未形成通路。包括:a.内外槽装反;b.外槽液过少;c.电泳槽底部的绝缘体未去掉(比如倒胶用的橡胶皮) |