照高效液相色谱法（2010年版药典二部附录ⅤD）测定。
色谱条件与系统适用性试验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（28：72）为流动相；检测波长为245nm。取氢化可的松与泼尼松龙，加甲醇溶解并稀释制成每1mL中约含5μg的溶液，取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，出峰顺序依次为泼尼松龙与氢化可的松，泼尼松龙峰与氢化可的松峰的分离度应符合要求。
测定法
取本品适量，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成每1mL中约含0.1mg的溶液，精密量取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取氢化可的松对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。
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