脆弱类杆菌的检测方法介绍

　　最初用于BFT检测的方法是动物接种法，但动物对BFT的敏感性存在很大差别，而且动物接种法特异性较差，现已淘汰。

　　1992年以来，利用BFT能改变人类结肠癌衍生的连续肠上皮细胞系，HT-29/C1细胞（克隆的HT-29细胞）经BFT作用3h后出现圆形变，并且细胞簇散裂，敏感性、特异性分别达到89%和100%，纯化BFT灵感度达0。1ng/ml。该方法的主要缺点为HT-29/C1细胞形态改变缺乏客观评判标准，容易受实验人员主观因素的影响；HT-29/C1细胞的培养和厌氧菌的分离鉴定需要复杂的实验条件和较高的技术要求并且费时。

　　PCR以BFT为检测目标，1997年Pantosti等采用HT-29/C1细胞培养和PCR同时检测113株来自培养物和粪便标本的BFT，结果表明两者的实验结果完全吻合，并且PCR的灵敏达105~104CFU/g粪便标本。Kato等用HT-29/C1细胞培养和PCR方法检测188株从肠道外标本分离的Bf，结果发现35株Bf两种方法均为阳性，而细胞培养法阴性，两者的相符率达99%以上。Shetab等报道套用式PCR可将灵敏度进一步提高到103~102CFU/g粪便标本。由于粪便中存在的抑制物可降低PCR的敏感性。为了排除PCR抑制物的干扰，Weintraub等采用特异性单抗包被的磁球捕获、分离细胞与PCR相结合的IMS-PCR方法直接检测粪便是的ETBF，将灵敏度提高至0~50CPU/g粪便标本。PCR方法存在的主要问题：粪便及其他肠外标本均含有PCR抑制物，易导致PCR敏感性降低，造成假阴性结果；PCR以bft为检测目标，如果存在基因不表达或死亡细菌残骸，则易导致假阴性；PCR 方法费用较高。

　　此外，单克隆抗体检测亦具有较高的敏感性和特异性。