医药工业洁净室悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法

医药工业洁净室（区）悬浮粒子 测试方法4.1 方法提要本测试方法采用计数浓度法，即通过测定洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某粒径的悬浮粒子数，来评定洁净室（区）的悬浮粒子洁净度等级。4.2 仪器 a）光散射粒子计数器（用于粒径大于或等于0.5μm的悬浮粒子计数）；b）滤膜显微镜（用于粒径大于或等于5μm的悬浮粒子计数）。4.2.1 光散射粒子计数器原理空气中的悬浮粒子在光的照射下产生光散射现象，散射光的强度与粒子的表面积成正比。4.2.2 光散射粒子计数器使用要点使用仪器时应严格按照仪器说明书操作。4.2.2.1 仪器开机，预热至稳定后，方可按说明书的规定对仪器进行校正。4.2.2.2 采样管口置采样点采样时，在确认计数稳定后方可开始连续读数。4.2.2.3 采样管必须干净，严禁渗漏。4.2.2.4 采样管的长度应根据仪器的允许长度。除另有规定外，长度不得大于1.5m。4.2.2.5 计数器采样口和仪器工作位置应处在同一气压和温度下，以免产生测量误差。4.2.2.6 必须按照仪器的检定周期，定期对仪器作检定。以保证测试数据的可靠性。医药工业洁净室（区）浮游菌 测试方法4.1 方法提要本方法采用计数浓度法，即通过收集悬游在空气中的生物性粒子于专门的培养基，经若干时间，在适宜的生长条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，从而判定洁净环境内单位体积空气中的活微生物数，以此来评定洁净室（区）的洁净度。4.2 所用的仪器、设备和培养基 a）浮游菌采样器；b）真空抽气泵；c）培养皿；d）培养基；e）恒温培养箱。4.3 浮游菌采样器浮游菌采样器宜采用撞击法机理的采样器，一般采用狭缝式采样器或离心式采样器。4.3.1 采用的浮游菌采样器必须要有流量计和定时器。4.3.2 狭缝式采样器的原理狭缝式采样器由附加的真空抽气泵抽气，通过采样器的缝隙式平板，将采集的空气喷射并撞击到缓慢旋转的平板培养基表面上，附着的活微生物粒子经培养后形成菌落，予以计数。4.3.3 离心式采样器的原理离心式采样器由于内部风机的高速旋转，气流从采样器前部吸入从后部流出，在离心力的作用下，空气中的活微生物粒子有足够的时间撞击到专用的固形培养条上，经培养后形成菌落，予以计数。4.3.4 狭缝式采样器的使用要点应严格按仪器说明书的要求进行操作。4.3.4.1 校验采样器必须按仪器的检定周期，定期对仪器作检定，以保证测试数据的可靠性。校验的项目有：定时器、转盘转速、流量计。4.3.2 每次测试前应按说明书上的规定，先接通电源，启动真空抽气泵，然后调节流量计及定时器。4.3.4.3 空气采样量根据需要选定。已知采样器的流量（L/min），设定采样时间（min），两者相乘即采样量（L）。4.3.4.4 注意事项4.3.4.4.1 采样口必须用便于消毒及化学性能稳定的材料制造。4.3.4.4.2 采样管严禁渗漏，内壁应光滑。4.3.4.4.3 采样管的长度应根据测点的高度定，尽量减少弯曲。4.4 真空抽气泵4.4.1 真空抽气泵的排气量应与采样器匹配。4.4.2 宜采用无油真空抽气泵，必要时可在非气口安装气体过滤器。4.4.3 真空抽气泵安装的位置必须适当，一般装在采样器下面。4.5 培养皿4.5.1 狭缝式采样器一般采用�0�4 150mm×15mm、�0�4 90mm×15mm、�0�4 65mm×15mm三种规格的硼硅酸玻璃培养皿。可根据所选用采样器选择合适的培养皿。4.5.2 离心式采样器采用专用的固形培养条。4.6 培养基普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基。其配制方法见附录A（标准的附录）。4.7 恒温培养箱必须定期对培养箱的温度计进行检定。4.8 测试步骤4.8.1 测试前仪器、培养皿表面必须严格消毒。4.8.1.1 采样器进入被测房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌，用于100级洁净室的采样器宜一直放在被测房间内。4.8.1.2 用消毒剂擦净培养皿的外表面。4.8.1.3 采样前，先用消毒剂消毒采样器的顶盖、转盘以及罩子的内外面，采样结束，再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。4.8.1.4 采样口及采样管，使用前必须高温灭菌。如用消毒剂对采样管的外壁及内壁进行消毒时，应将管中的残留液倒掉并晾干。4.8.1.5 采样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒。4.8.2 狭缝式采样器的采样程序4.8.2.1 仪器经消毒后先不放入培养皿，开动真空泵抽气，使仪器中的残余消毒剂蒸发，时间不少于5min，并调好流量、转盘转速。4.8.2.2 关闭真空泵，放入培养皿，盖上盖子后调节采样器缝隙高度。4.8.2.3 置采样口于采样点后，依次开启采样器、真空泵，转动定时器，根据采样量设定采样时间。4.8.3 培养4.8.3.1 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。4.8.3.2 在30℃～35℃培养箱中培养，时间不少于48h。4.8.3.3 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。4.8.4 菌落计数4.8.4.1 用肉眼直接计数、标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，有否遗漏。4.8.4.2 若平板上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。4.8.5 注意事项4.8.5.1 使用前仔细检查每个培养皿的质量，培养基及培养皿有变质、破损或污染的不能使用。4.8.5.2 采取一切措施防止采样管的污染和其他人为对样本的污染。4.8.5.3 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。4.8.5.4 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落或培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。 医药工业洁净室（区）沉降菌测试方法4.1 方法概述本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。4.2 所用的仪器和设备4.2.1 高压消毒锅使用时应严格按照仪器说明书操作。4.2.2 恒温培养箱必须定期对培养箱的温度计进行检定。4.2.3 培养皿一般采用�0�490mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。4.2.4 培养基普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基。其配制方法见附录A（标准的附录）。4.3 测试步骤4.3.1 采样方法将已制备好的培养皿按5.4.1.2的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。4.3.2 培养4.3.2.1 全部采样结束后，将培养倒置于恒温培养箱中培养。4.3.2.2 在30℃～35℃培养箱中培养，时间不少于48h。4.3.2.3 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。4.3.3 菌落计数4.3.3.1 用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，不否遗漏。4.3.3.2 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2 个或2个以上菌落计数。4.4 注意事项4.4.1 测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。4.4.2 采取一切措施防止人为对样本的污染。4.4.3 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。4.4.4 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉定物的区别，必要时用显微镜鉴别。4.4.5 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。