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很多情况我们都常用三步法,保证在72度延伸,但是如果条件很苛刻,我们用两步法能够得到三步法批不到的片段。您说的如果是定量PCR的话,多情况用二步法,因为可以再60度左右既可以退火又可以延伸,因此很多定量PCR仪推荐用两步法。但是如果你想得到更加严谨的数据,三步法用于定量PCR是更准确的。