显微镜的分辨率是指能被显微镜清晰区分的两个物点的最小间距的能力。
其计算公式是σ=λ/NA
式中σ为分辨率；λ为光线的波长；NA为物镜的数值孔径（NA=nsina/2,n为介质的折射率，a为孔径角，即样品对物镜孔径角）。可见物镜的分辨率是由物镜的NA值与照明光源的波长两个因素决定。NA值越大，照明光线波长越短，则σ值越小，分辨率就越高。
要提高分辨率，即减小σ值，可采取以下措施
（1） 降低波长λ值，使用短波长光源。
（2） 增大介质n值以提高NA值（NA=nsina/2）。
（3） 增大孔径角a值以提高NA值。
（4） 增加明暗反差。
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