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由于嘌呤碱或嘧啶碱具有共轭双键，所以核酸在260nm有最大吸收峰，而蛋白质含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸，在280nm具有最大吸收峰。通过测定RNA的260与280nm的OD比值，可帮助判断其纯度，纯RNA 样品的OD260/OD280 大约为2.0。一般测定OD值，可以控制在0-0.4之间，如果超出1以上，由于浓度过大，检测的结果不在线性范围内，导致结果值降低，因此需要稀释之后重新测定。
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