出峰快结束的时候又出来一个不全的峰,对于这种情况,很有可能是你的柱子不干净,才用梯度洗脱法冲洗柱子。单元泵的话,用几个不同比例的流动相冲洗柱子,至基线稳定。
色谱柱走出来的峰型拖尾很严重,这个有好几种原因:流动相的比例,如甲醇:水的比例不一样,出峰时间和拖尾程度不一样的,还有你的柱型是否和检测物质匹配。我经常能遇到流动相的比例不同,分离度差别很大的情况。
拖尾原
因
解决方法
1、筛板阻塞
1、a、反冲色谱柱
b、更换进口筛板
c、更换色谱柱
2、色谱柱塌陷
2、填充色谱柱
3、干扰峰
3、a、使用更长的色谱柱
b、改变流动相或更换色谱柱
4、流动相PH选择错误
4、调整PH值。对于碱性化合物,低PH值更有利于得到对称峰
5、样品与填料表面的溶化点发生反应图
5、a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂
b、更改色谱柱
F、
早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
原
因
解决方法
1、柱外效应
1、a、调整系统连接(使用更短、内径更小的管路)
b、使用小体积的流通池
G、
K’增加时,脱尾更严重
原
因
解决方法
1、二级保留效应,反相模式
1、a、加入三乙胺(或碱性样品)
b、加入乙酸(或酸性样品)
c、加入盐或缓冲剂(或离子化样品)
d、更换一支柱子
2、二级保留效应,正相模式
2、a、加入三乙胺(或碱性样品)
b、加入乙酸(或酸性样品)
c、加入水(或多官能团化合物)
d、试用另一种方法
3、二级保留效应,离子对
3、加入三乙胺(或碱性样品)
H、
酸性或碱性化合物的峰拖尾
原
因
解决方法
1、缓冲不合适
1、a、使用浓度50-100mM的缓冲液
b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液
I、
额外的峰
原
因
解决方法
1、样品中有其他组份
1、正常
2、前一次进样的洗脱峰
2、a、增加运行时间或梯度斜率
b、提高流速
3、空位或鬼峰
3、a、检查流动相是否纯净
b、使用流动相作为样品溶剂
c、减少进样体积