胚胎干细胞的分离方法介绍

分离囊胚的内细胞群（ICM）细胞，再进行体外培养即可取得胚胎干细胞。目前，取得胚胎干细胞的方法已有一定改进，但仍无可避免地会杀死胚胎。

囊胚由两大部分构成：处于外围的滋养层以及处于内部的内细胞群。滋养层细胞会分化为胚胎外的组织（胎盘等），而内细胞群则会分化为胚胎的各种结构。

最早期分离胚胎干细胞的方法是先用蛋白酶分解透明带的蛋白质（囊胚外围的一层细胞外基质），再利用免疫手术（immunosurgery）专一地使滋养层细胞裂解，从而取得内部的内细胞群细胞，之后体外培养和繁殖取得的内细胞群细胞，即可建立胚胎干细胞系。目前胚胎干细胞的分离方法已有了一定的改进，比如现在已有使用激光去除透明带的技术。

获取胚胎干细胞的成功率相当低，即使成功取得胚胎干细胞，维持其不分化的状态也十分困难。为了阻止胚胎干细胞在培养过程中分化，培养基需加入如白血病抑制因子（LIF）等因子。最初，胚胎干细胞需要在含有喂养层细胞的培养基上培养。喂养层细胞能为胚胎干细胞提供特定的微环境，以抑制胚胎干细胞的分化。喂养层细胞常常使用经过有丝分裂阻断剂（如丝裂霉素）处理过的胚胎成纤维细胞。目前已能在成分清楚、无异物、不含有血清以及喂养层细胞的培养基上培养胚胎干细胞。