同种细胞在培养时2个靠在一起的细胞自发合并,称自发融合;异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合,称诱发融合。
仙台病毒法融合
①两种细胞在一起培养,加入病毒,在4℃条件下病毒附着在细胞
膜上。并使两细胞相互凝聚;
②在37℃中,病毒与细胞膜发生反应,细胞膜受到破环,此时需
要Ca2+和Mg2+,最适PH为8.0一8.2;
③细胞膜连接部穿通,周边连接部修复,此时需Ca2+和ATP;
④融合成巨大细胞,仍需ATP。
聚乙二醇(PEG)法
聚乙二醇(PEG)结构为:HOH2C(CH20CH2)nCH2OH,分子量大于200小于6000者均可用作细胞融合剂。PEG经高压灭菌后,与温热的Engle氏液混合。一般选用分子量为4,000,常用浓度为50%,pH8.0~pH8.2(用10%NaHCO3调整),分子量小的PEG,融合效应差,又有毒性,分子量过大,则粘性太大,不易操作。
电融合法
在直流电脉冲的诱导下,细胞膜表面的氧化还原电位发生改变,使异种细胞粘合并发生质膜瞬间破裂,进而质膜开始连接,直到闭和成完整的膜,形成融合体。
优点:融合率高、重复性强、对细胞伤害小;
装置精巧、方法简单、可在显微镜下观察或录像观察融合过程;
免去PEG诱导后的洗涤过程、诱导过程可控性强。
离心振动
物理方法之一,使用离心机等机器实现细胞之间的融合。