现在的机器都是自动调节，不过也要做好准备工作。我大致说一下原理。
做补偿调节，需要以下的样本，无任何染色的样本，分别是FITC， PE， PerCP还有APC单染阳性的样本，所以你这里需要一共5个管子。
在纯手工的年代，你需要画出这四个颜色两两配对的散点图，比如FITC-PE， FITC-PerCP， FITC-APC， PE-PerCP，PE-APC， PerCP-APC，这一共6个散点图。
然后，先上未染色的样本，调节各个荧光通道的电压，是细胞都位于各个散点图的左下角。
在记录前，把每个样本都先跑一边，目的是观察电压的设置是否正确。比如FITC和PE会有重叠，上FITC阳性管的时候，虽然其他通道会有些信号，但FITC通道的信号应该最强。如果发生了其他通道信号强于目的通道的情况，就要进一步调节电压，是目的通道的信号最强。这样把每一个单染的样本都过一遍，确保目的通道的信号最强。
现在的仪器软件，不需要你自己画这些散点图，但是调剂电压的这一步是必须的，可以在阴性对照管的页面下完成。
电压调节好以后，记录阴性对照和阳性单染样本的信号，然后机器会自动结算补偿值。
如果你要手工计算，这里是原则：
以FITC-PE为例。在散点图上，划分为四个象限。如果纵坐标是FITC， 横坐标是PE。调节电压后，阴性的细胞位于左下象限。这是可以得出阴性细胞横坐标（PE）和纵坐标（FITC）的平均荧光强度值。电压调好以后，上单色阳性样本。比如上牌FITC阳性，这时不要再改变电压了，而是调节补偿系数，最终目的就是让FITC阳性的细胞都位于向下象限，并且该细胞团的纵坐标（PE）荧光强度和阴性细胞团的值一致。其他颜色的两两补偿以此类推。
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