比色法检测左旋肉碱的相关介绍

　　一、原理：试样经过水提取，用高氯酸沉淀蛋白质后过滤。滤液经碱皂化后使溶液中结合态的左旋肉碱游离出来。左旋肉碱与乙酰辅酶A在乙酰肉碱转移酶的催化下反应生成乙酰肉碱和游离的辅酶A。游离的辅酶A和2-硝基苯甲酸反应生成黄色物质，其颜色深浅与游离的辅酶A含量成正比。因游离的辅酶A与左旋肉碱是等摩尔反应关系，可间接求出试样中左旋肉碱含量。

　　二、分析步骤

　　试样处理：准去称取5 g（精确0.0001 g）混合均匀的试样于烧杯中，用30 mL 40℃温水溶解，转入100 mL容量瓶中。加入10 mL 13%高氯酸溶液，混合均匀后静止20 min。用蒸馏水定容至刻度，混匀，用定量滤纸过滤。

　　取滤液20 mL，用4 mol/L氢氧化钾溶液调pH为12.5~13.0后，置于40℃水浴60 min.冷却后用13%高氯酸调pH为7.0~7.5。将样液转入50 mL容量瓶中，用蒸馏水定容。混匀后置于4℃冰箱中过夜。将试样处理液从冰箱中取出放置至室温，取上清液用0.45 μm滤膜过滤后备用。

　　标准曲线的绘制：吸取左旋肉碱标志工作液2.0 mL于1 cm比色皿中，加入0.8 mL显色工作液和100 μL乙酰辅酶A溶液，盖上比色皿盖，混合均匀后放入分光光度计中，分光光度计的波长调为412 nm，5 min后归零。迅速加入100 μL乙酰肉碱转移酶溶液，混合均匀后放入分光光度计中，反应10 min后记录吸光值。以左旋肉碱标准工作液的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，制作标准曲线。

　　试样测定：取2.0 mL试样处理液按标准曲线的绘制步骤测定其吸光值。在标准曲线上查得试样待测液的浓度。