⑴.5’ RACE-PCR:利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作为一个引物结合位点,以连有SMART寡核营酸序列通 用接头引物的Oligo(dT)30MN作为锁定引物反转录合成标准第一链cDNA。然后用一个基因特异引物GSP2 (gene specific primer,GSP)作为上游引物,用一个含有部分接头序列的通用引物UPM(universal primer,UPM) 作为下游引物,以cDNA第一链为模板,进行PCR循环, 把目的基因5‘末端的DNA片段扩增出来。
⑵.3’ RACE-PCR:利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作为一个引物结合位点,以连有SMART寡核营酸序列通用接头引物的Oligo(dT)30MN作为锁定引物反转录合成标准第一链cDNA。然后用一个基因特异引物GSP1 (gene specific primer,GSP)作为上游引物,用一个含有部分接头序列的通用引物UPM(universal primer,UPM) 作为下游引物,以cDNA第一链为模板,进行PCR循环, 把目的基因3‘末端的DNA片段扩增出来。