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做miRNA的PCR的方法介绍

2022.10.18
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zhaoqisun

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加尾法和茎环法

加尾法,是指把miRNA再人工加一个polyA的尾巴,这样它的结构就变长,有点象是典型的mRNA结构。很多公司提供有现成的miRNA加尾法逆转录试剂盒。按常规方法提取总RNA,用于逆转录。做完逆转录后,可参考的方法去做PCR。注意,这时的PCR需要的上下游引物,一般是上游引物就直接用miRNA的序列(把U换成T即可),下游引物则要参考逆转录试剂盒的加尾,一般由逆转录试剂盒的同家公司特殊提供。

茎环法也是一种很常见的方法。它是模拟miRNA在形成过程中的茎环结构(Stem Loop),在逆转录过程中把miRNA成熟体序列加长,同时其序列内部互相配对形成茎环结构。


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