PCR荧光标记选择探针法还是染料法？

   特异性荧光标记——探针法：

   是目前临床最常用的方法，在加入一对引物的同时再加入一对探针，特异性好，这里列举的是TaqMan水解探针：一段与靶基因特异性结合的序列，分别在5’端加入荧光报告基团，3’端加入荧光淬灭基团。其核心是利用taq酶的5’-3’外切酶活性切断探针，使得使荧光报告基团和荧光淬灭基团分离，从而使荧光监测系统可接收到荧光信号，每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步，荧光强度就可代表模板数量。

    非特异性荧光标记——染料法：

   一般采用DNA染料SYBR® Green I，染料能够与双链结合，发出荧光，它自身也会发出微弱的荧光，应用体系内所有荧光的信号强度与DNA量成正比，所以它对模板没有选择性，且不需要设计复杂的探针，经济实惠。但是也因此暴露缺陷，染料能与所有双链DNA结合，导致非特异性扩增和引物二聚体也会被检测出，并干扰结果。有缺陷就有补救的方法，溶解曲线的分析能帮助操作者判断产物的特异性，溶解曲线是指随温度升高DNA的双螺旋结构降解程度的曲线。单一峰的溶解曲线说明扩增特异性好，有双峰代表出现了非特异扩增或引物二聚体。

    报告荧光：6-FAM、JOE、VIC、NED、CY3、Texas RED、CY5

    淬灭荧光：MGB-NFQ、TAMRA、BHQ

    参比荧光：ROX