凝血因子Ⅷ的测定方法

　　根据中华人民共和国药典三部 附录X N 人凝血因子VIII测定法（一期法）

　　本法系用人凝血因子VIII缺乏血浆为基质血浆，采用一期法测定供试品人凝血因子VIII效价。

　　试剂

　　（1）3.8%枸橼酸钠9.5g，加水溶解并稀释至250ml。

　　（2）咪唑缓冲液（pH7.3）取咪唑0.68g和氯化钠1.17g，加水使溶解成100ml，加入0.1mol/L盐酸溶液42.2ml，再加水稀释至200ml，即得。

　　（3）稀释液取一体积的3.8%的枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合，加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%

　　（4）激活的部分凝血活酶（APTT）试剂

　　（5）人凝血因子VIII缺乏血浆 为人凝血因子VIII含量低于1%的人血浆或人工基质血浆

　　（6）0.05mol/L氯化钙溶液取氯化钙（CaCl2·2H2O）147g，加水溶解并稀释至1000ml，配制成1mol/L的氯化钙贮存液，用前用水稀释20倍，配制成0.05mol/L氯化钙溶液。

　　人凝血因子VIII标准液的制备 用人凝血因子VIII缺乏血浆将标准品稀释成每1ml含1IU凝血因子VIII，再用稀释液分别进行10倍、20倍、40倍和80倍稀释，置冰浴待用。

　　供试品溶液的制备 用人凝血因子Ⅷ 缺乏血浆将标准品稀释成每1ml含1IU凝血因子Ⅷ，再用稀释液进行10倍和20倍或40倍稀释，置冰浴待用。

　　测定法

　　取激活的部分凝血活酶试剂0.1ml，置37℃水浴保温一定时间（一般4min），加入凝血因子Ⅷ缺乏血浆0.1ml、供试品溶液0.1ml，混匀，置37℃水浴保温一定时间（一般5min），加已预热至37℃ 0.05mol/L氯化钙溶液0.1ml，记录凝固时间。

　　用不同稀释度的人凝血因子Ⅷ标准溶液0.1ml替代供试品溶液，同法操作。

　　将标准溶液人凝血因子Ⅷ效价（IU/ml）的对数对其相应的凝固时间（秒）的对数进行直线回归处理，求出直线回归方程。计算供试品溶液人凝血因子Ⅷ效价，再乘以稀释倍数，即为供试品人凝血因子Ⅷ效价（IU/ml）。