肌内注射或静脉滴注成人一次0.5～1.0g，每4～6小时一次，病情严重者剂量可增加，败血症和脑膜炎病人的每天剂量可增至12g，小儿体重在40kg以下者，每6小时按体重12.5～25mg/kg，体重超过40kg者给以成人剂量。新生儿体重低于2kg者，1～14天时每12小时按体重25mg/kg；15～30天时每8小时按体重25mg/kg；体重超过2kg者，1～14天每8小时按体重25mg/kg；15～30天时每6小时按体重25mg/kg；早产儿的每天剂量为按体重25mg/kg分次给予，但须谨慎使用。
对轻中度肾功能减退病人，甲氧西林的剂量可不作调整，但对严重肾功能减退病人，避免应用过大剂量，以防神经系统等毒性反应的发生。由于该品在肝内代谢量较多，其血清半衰期较短，对严重感染采用的剂量仍可较其他异恶唑组青霉素为大。如供肌内注射，每500mg加灭菌注射用水2.8ml；如供静脉注射，则每1g加灭菌注射用水或氯化钠注射液10ml。静脉滴注甲氧西林的溶液浓度一般为20～40mg/ml（快速静脉滴注）。
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