分析测试百科网

搜索

喜欢作者

微信支付微信支付
×

荧光素酶报告基因的技术流程

2023.2.06
头像

超级艾蛋木啊

致力于为分析测试行业奉献终身

  1. 启动子的预测

  2. 转录因子的预测

  3. 报告基因质粒的构建

  4. 实验方法及结果分析 

    55e736d12f2eb9382d288d03de628535e4dd6ffe?x-bce-process=image%2Fresize%2Cm_lfit%2Cw_600%2Ch_800%2Climit_1%2Fquality%2Cq_85%2Fformat%2Cf_auto



  1. 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。

  2. 设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。

  3. 筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。

  4. 扩增转录因子质粒，提纯备用。同时准备相应的空载质粒对照，提纯备用。

  5. 培养293（或其它目的细胞），并接种于24孔板中，生长10-24小时（80%汇合度）。

  6. 将报告基因质粒与转录因子表达质粒共转染细胞。

  7. 提取蛋白并用于荧光素酶检测。

  8. 加入底物，测定荧光素酶的活性。

  9. 计算相对荧光强度，并与空载对照比较。


荧光素酶
互联网
文章推荐