用甲醇活化不能超过15秒，时间太久会对pvdf膜造成损伤。找一个平皿，倒入一定体积的纯甲醇，用镊子夹着膜边角在纯甲醇里漂一下，见到膜由不透明变为均一的半透明，大概需要5秒左右即可。然后立即向平皿中加入不含甲醇的转膜液，使甲醇的终浓度在20％，将凝胶和膜以及滤纸在其中平衡30min左右即可转膜，在整个过程中注意不要让膜干了，如果膜干了就需要重新活化。注意操作中不要划伤膜或者弄脏膜，否则显色后会出现痕迹，干扰结果判定。膜的孔径也是值得考虑的问题，普通大中分子量蛋白可选0.45um的就可以了,但对小分子量的多肽则需要0.22um的膜。尼龙膜和NC膜不需活化。
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