不用甲醇浸泡的PVDF很难被转膜缓冲液浸润。
实验方法：
（1）PDVF膜及滤纸的预处理：剪裁与胶大小一致的PVDF膜，将其浸入甲醇液中浸泡10s（快速激活PDVF膜），去离子水处理5min，1×转移缓冲液处理10min以上。
（2）剪裁与胶同样大小的6层滤纸，用转移液缓冲液浸泡后待用。
（3）取下电泳板，将其平置（使凹面玻璃板在下），小心取出夹板中的垫片及去掉上层玻璃板，切除多余凝胶，将含样品胶在蒸馏水及1转膜液中各漂洗一次。
（4）转膜。
注意事项：
（1）开始转移时一定要检查电流大小。过高电流产生的热量会导致转移失败，通常高电流是由于转移液配制不当造成的。
（2）低离子强度转移缓冲液可使用较高电压，而不会导致高电流和过热，但转移过程中由凝胶中渗出的电解质可导致转移缓冲液电导增加，缓冲能力降低。
（3）也可在恒流状态下以200mA转移2h。
（4）若转移中因凝胶变形发生条带扭曲或由于凝胶中电解质渗出导致过热，可预先将凝胶在转移缓冲液中浸泡。
（5）使用预先染色的蛋白质分子量标准品或转移后将凝胶染色，可检查转移是否彻底。
（6）对于较大蛋白质，较低的丙烯酰胺浓度可获得较好的转移效果。
（7）对电转移来说，最常遇到的问题是目的蛋白质转移效率低，转移效率可由转移后对凝胶或膜染色来进行观察。
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