基因组样品的模板量摸一个浓度吧，这个模板浓度不太合适。PCR产物以smear的形式出现，要么是样本降解，要么就是完全没有特异的扩增。
要通过PCR筛选基因敲除的小鼠，最基本的要求就是引物特异性好，扩增效率高。不然没法筛选的。如果这对引物之前筛选过，你可以换换模板，重新合成下引物就行，如果完全没有用于筛选，或者没能用基因组扩增过，就需要从引物着手考虑了。
这个条件看起来完全没有特异扩增，可以先尝试提高退火温度，或者是用touchdown PCR试试，如果还是不行，我就建议重新设计引物了。有可能的话，以基因组为模板设计引物，以避免其他区域的干扰。
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