照紫外可见分光光度法(通则0401)测定。底物溶液冰冻保存,但不得反复冻融。取N-乙酰-L酪氨酸乙酯23.7mg,置100ml量瓶中,加磷酸盐缓冲液(取0.067mol/L磷酸二氢钾溶液38.9ml与0.067mol/L磷酸氢钠溶液61.1ml,混合,pH值为7.0)50ml,温热使溶解,冷却后再稀释至刻度,摇匀供试品溶液取本品适量,精密称定,加0.0012mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中含12~16糜蛋白酶单位的溶液。测定法取0.0012mol/L盐酸溶液0.2ml与底物溶液3.0ml,在25℃±0.5℃,于237nm的波长处测定并调节吸光度为0.200。再精密量取供试品溶液0.2ml,加底物溶液3.0ml,立即计时并摇匀,每隔30秒读取吸光度,共5分钟(重复一次),吸光度的变化率应恒定,恒定时间不得少于3分钟若变化率不能保持恒定,可用较低浓度另行测定。
每30秒的吸光度变化率应控制在0.008~0.012,以吸光度为纵坐标,时间为横坐标,作图,取在3分钟内成直线部分的吸光度,按下式计算。A-A0.0075TW 式中P为每1mg廉蛋白酶的效价,单位A2为直线上开始的吸光度;A1为直线上终止的吸光度;
T为A2至A1读数的时间,分钟;W为测定液中含供试品的量,mg;0.0075为在上述条件下,吸光度每分钟改变0.0075,即相当于1个糜蛋白酶单位。
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