胰酶的检查方法

胰蛋白酶照紫外-可见分光光度法(通则401)测定。氯化钙溶液取氯化钙1.47g,加水500ml使溶解,用0.lmol/L盐酸溶液或0.lmol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.0~6.2硼酸盐缓冲液取硼砂2.85g、硼酸10.5g与氯化钠2.50g,加水使溶解并制成1000ml,调节pH值至7.5±0.1。供试品原液取本品约0.1g,精密称定,置乳钵中,加冷至5℃以下的氯化钙溶液少量,研磨均匀,移至100ml量瓶中,用氯化钙溶液稀释至刻度,摇匀;精密量取适量,用冷至5℃以下的硼酸盐缓冲液定量稀释制成每1m中约含胰蛋白酶0.12单位的溶液对照品溶液取酪氨酸对照品,精密称定,加0.2mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1m中约含50μg的溶液测定法取试管3支,分别精密量取供试品原液1ml与硼酸盐缓冲液2ml,在40℃水浴中保温10分钟,分别精密加人在40℃水浴中预热的酪蛋白溶液(取酪蛋白对照品1.5g,加0.1mol/L氢氧化钠溶液13ml与水40ml,在60℃水浴中加热使溶解,放冷,用水稀释至100ml,调节pH值至8.0)5ml,摇匀,立即置40℃士0.5℃水浴中准确反应30分钟,再各精密加入5%三氯醋酸溶液5m终止反应,混匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液;另精密量取供试品原液1ml,加硼酸盐缓冲液2.0ml,在40℃水浴中保温10分钟,精密加入5%三氯醋酸溶液5ml,摇匀,置40℃±0.5℃水浴中准确反应30分钟,立即精密加入酪蛋白溶液5ml,摇匀,滤过,取续滤液作为空白;在275nm的波长处,测定并计算供试品溶液吸光度的平均值(A)。另以0.2mol/L盐酸溶液为空白,在275nm的波长处测定对照品溶液的吸光度(As)。按下式计算。每1g含胰蛋白酶活力(单位)=A。X、Ws13n s181.1930W 式中Ws为对照品溶液每1ml中含酪氨酸的量,μg;W为供试品取样量,g;n为供试品的稀释倍数(500)。在上述条件下,每分钟水解酪蛋白生成三氯醋酸不沉淀物(肽及氨基酸等)在275nm波长处与1mol酪氨酸相当的酶量,为1个胰蛋白酶活力的单位供试品溶液测得的A值应在0.15~0.6,否则应调整浓度,另行测定。胰淀粉酶供试品溶液的制备取本品约0.3g,精密称定,置研钵中,加冷至5℃以下的磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾13.61g与磷酸氢二钠35.80g,加水使溶解成1000ml,调节pH值至6.8)少量,研磨均匀,用上述磷酸盐缓冲液定量稀释制成每1ml中约含胰淀粉酶10~20单位的溶液。测定法取1%可溶性淀粉溶液[取经105℃千燥2小时的可溶性淀粉(供胰淀粉酶测定)1.0g,加水10ml,搅匀后,边搅拌边缓缓倾入100m1沸水中,继续煮沸20分钟,放冷,用水稀释至100ml]25ml、上述磷酸盐缓冲液10ml、1.2%氯化钠溶液1m1与水20ml,置250ml碘瓶中,在40℃水浴中保温10分钟,精密加入供试品溶液1ml,摇匀,立即置40℃±0.5℃水浴中准确反应10分钟,加1mol/L盐酸溶液2ml终止反应,摇匀,放至室温后,精密加碘滴定液(0.05mol/L)10ml,边振摇边滴加0.1mol/L氢氧化钠溶液45ml,在暗处放置20分钟,加硫酸溶液(1→4)4m,用硫代硫酸钠滴定液(0.1mo/L)滴定至无色。另取1%可溶性淀粉溶液25ml、上述磷酸盐缓冲液10ml、1.2%氯化钠溶液1m与水20ml,置碘瓶中,在40℃士0.5℃水浴中保温10分钟,放冷,加1mol/L盐酸溶液2ml,摇匀,加入供试品溶液1.0ml,摇匀,精密加入碘滴定液(0.05mol/L)10ml,边振摇边滴加0.1mol/L氢氧化钠溶液45ml,在暗处放置20分钟,加硫酸溶液(1→4)4m,用硫代硫酸钠滴定液(O.1mol/L)滴定至无色,作为空白对照,每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当于9.008mg无水葡萄糖。按下式计算每1g含胰淀粉酶活力(单位)(B-A)F9.008×1000n 180.16 式中A为供试品消耗硫代硫酸钠滴定液的容积,ml;B为空白消耗硫代硫酸钠滴定液的容积,ml; F为硫代硫酸钠滴定液的浓度(mol/L)换算值;W为供试品取样量,g;n为供试品稀释倍数(200。在上述条件下,每分钟水解淀粉生成1mol葡萄糖的酶量,为1个胰淀粉酶活力的单位。(B-A)的硫代硫酸钠滴定液应为2.0~4.0ml,否则应调整浓度,另行测定。胰脂肪酶供试品溶液取本品约0.1g,精密称定,置乳钵中,加冷至5℃以下的三羟甲基氨基甲烷缓冲液(取三羟甲基氨基甲烷606mg,加0.1mol/L盐酸溶液45.7ml,加水至100ml,摇匀,调节pH值至7.1)少量,研磨均匀,用上述缓冲液定量稀释制成每1ml中约含胰脂肪酶8~16单位的溶液测定法取橄榄油乳液(取橄榄油4ml与阿拉伯胶7.5g,研磨均匀,缓缓加水研磨使成100ml,用高速组织捣碎机以每分钟8000转搅拌两次,每次3分钟,取乳剂在显微镜下检查,90%乳粒的直径应在3m以下,并不得有超过10pm的乳粒)25ml、牛胆盐溶液[取牛胆盐参照试剂适量,用水制成(2→25)的溶液]2m1与水10ml,置100ml烧杯中,用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)调节pH值至9.0,在37℃±0.1℃水浴中保温10分钟,再调节pH值至9.0,精密量取供试品溶液lml,在37℃士0.1℃水浴中准确反应10分钟,同时用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定使反应液的pH值恒定在9.0,记录消耗氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)的量(ml)。另取在水浴中煮沸15~30分钟的上述供试品溶液1ml,照上述方法测定作空白对照,按下式计算每1g含有胰脂肪酶活力(单位)(A-B)M×1000n式中A为供试品消耗氢氧化钠滴定液的容积,ml;B为空白消耗氢氧化钠滴定液的容积,mlM为氢氧化钠滴定液的浓度,mol/L;W为供试品取样量,gn为供试品稀释倍数(50)。在上述条件下,每分钟水解脂肪(橄榄油)生成1gmol脂肪酸的酶量,为1个胰脂肪酶活力的单位。平均每分钟消耗的氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)的量应为0.08~0.16ml,否则应调整浓度,另行测定。