1.血象
血钾降低，代谢性碱中毒、糖耐量降低、红细胞、血红蛋白增多，外周血T细胞、B细胞比例紊乱。
2. 血浆皮质醇水平和昼夜节律测定
正常人皮质醇呈脉冲式分泌，有明显的昼夜节律。库欣综合征患者血浆皮质醇水平增高且昼夜节律消失。
3. 24小时尿游离皮质醇（UFC）测定
血皮质醇水平昼夜节律消失，测定24小时 UFC可避免血皮质醇的瞬时变化，也可避免受血中皮质类固醇结合球蛋白浓度的影响，对库欣综合征的诊断有较大的价值，诊断符合率约为98%，但一定要准确留取24小时尿量，并且避免服用影响尿皮质醇测定的药物。24小时17-羟皮质激素、尿游离皮质醇增高。17-羟皮质激素正常值为男性13.0～38.4μmol/24h女性12.1～30.9μmol/24h。17-羟皮质类固醇测定的敏感性不如尿游离皮质醇。
4.促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）兴奋试验
给垂体性库欣病患者静脉注射合成的羊或人CRH后，血ACTH及皮质醇水平均显著上升，其增高幅度较正常人明显；而大多数异位ACTH综合征患者却无反应。所以，本试验对这两种ACTH依赖性的库欣综合征的鉴别诊断有重要价值。
5. 去氨加压素（DDAVP）兴奋试验
去氨加压素是V2和V3血管加压素受体激动剂，可用于鉴别库欣病和异位ACTH综合征。该试验是CRH兴奋试验的替代试验，敏感性及特异性均低于CRH兴奋试验，用于无法获得CRH试剂时。
6.血清促肾上腺皮质激素（ACTH）
肾上腺皮质肿瘤不论良性还是恶性，其血浆ACTH水平均低于正常值低限，而ACTH依赖性的库欣病及异位ACTH综合征患者，其血浆ACTH水平均有不同程度的升高。因此，血浆ACTH水平测定对鉴别ACTH依赖性和非依赖性有肯定的诊断意义，但对鉴别是来源于垂体性还是异位的ACTH分泌增多却仅能作为参考。血清促肾上腺皮质激素水平升高显著，通常为基线值3～7倍，肾上腺皮质腺瘤通常为基线值的2倍，肾上腺癌测定值无变化。
7.大剂量地塞米松抑制试验
是目前用于确定过量ACTH来源的主要方法，服药后UFC或血皮质醇水平被抑制50%以上为阳性。库欣病患者在服药第二日UFC（尿自由皮质醇）或17-羟皮质类固醇水平可以被抑制到对照日的50%以下，其诊断符合率约为80%；而肾上腺腺瘤或腺癌患者一般不能被抑制到50%以下；异位ACTH综合征患者大多不被抑制，但某些支气管类癌患者例外。过夜大剂量地塞米松抑制试验的结果与经典法相似，且有快速、简便的优点。血皮质醇不受地塞米松抑制。
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