实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 一、还原1.将蛋白质溶解在 0.2mol/L 碳酸氢铵中,终浓度为 10~20mg/mL。 2.加人β-巯基乙醇,其浓度在 1%~5% 之间(体积分数)。 3.在溶液上方吹扫氮气以置换氧气,盖上试管,在室温下孵育付夜 4.用 SpeedVac 浓缩器干燥样品。加热样品会有助于碳酸氢铵挥发。 二、溴化氰切割5.将干燥的样品(10~20 mg/mL 重新溶解于 70% 的甲酸中。 6.在蛋白质溶液中直接加入固体溴化氰(每毫克蛋白质中加人 2 mg 溴化氰)。 对于很少量的蛋白质,加入一小块溴化氰即可。 溴化氰的加人量通常是甲硫氨酸残基的 20~100倍,也就相当于蛋白质的量和溴化氰的量大致相同。 7.盖上试管,使反应在室温避光条件下进行 18~20 h。 8.用 5 倍体积的水稀释反应混合物,以终止反应;在 SpeedVac 浓缩器中,通过冷冻干燥作用除去多余的试剂。 产物可以通过液相层析或凝胶电泳分离(或-20°C 储存)。 9.为了除去痕量溴化氰污染,把相关器具(如药匙、试管)浸在次氯酸钠溶液中,持续几分钟直到停止冒泡。 |