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大肠杆菌
琥珀酸钠 甲烯蓝 磷酸 丙二酸溶液 液体石蜡
试管 吸量管 电热水浴锅
(一)琥珀酸脱氢酶活力检查1. 在1支斜面菌种管中加入约5 ml,0.15 mol/L,pH7.3缓冲液,用玻璃棒刮下斜面上的菌体,振荡,倒入离心管中,2500 r/ min离心5 min,倾出洗涤液,菌体再加入6 ml,0.15 mol/L,pH7.3磷酸缓冲液,振荡,制成菌悬液待用。 2. 取两支试管各加入1 ml 0.02 mol/L琥珀酸钠溶液,1 ml,pH7.3,0.15 mol/L磷酸缓冲液,0.3 ml,0.001 mol/L甲烯蓝溶液。在1支试管中加入1 ml菌悬液,另一支试管加入已煮沸5 min的菌悬液1 ml(冷却后加入)作对照。混匀立即加入0.5~1 ml液体石蜡。 3. 将试管于37 ℃水浴恒温反应,观察记录甲烯蓝变色所需时间。 (二)丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用 取3支试管编号,按下表加入试剂:先在试管中加入琥珀酸钠、丙二酸钠、水、磷酸缓冲液、甲烯蓝等试剂,混匀后,立即加入一层液体石蜡,于37 ℃恒温反应,从加入液体石蜡开始记录甲烯蓝变白所需时间。
①第三管加入的菌液预先用沸水煮5 min作为对照管;②观察变色时不要振动试管,以免氧气漏入管内影响变色;③由于甲烯蓝容易被空气中的氧氧化,所以实验需在无氧条件下进行。可用液体石蜡封闭反应液。