NADH:硫辛酰胺氧化还原酶,硫辛酰胺脱氢酶。
此酶发现于细胞中,游离形式(二聚体)存在,与多酶复合体结合,与丙酮酸脱氢酶复合体、酮戊二酸脱氢酶复合体以及分支的含氧酸脱氢酶复合体相似。
此酶首先被 Straub(1939)发现,由于其在加入人为的电子受体如氰化铁、二氯酚吲哚酚和醌后,可以催化 NAD(P)H 的氧化,由此得名。
实验方法原理 | 此可逆反应可以从任一方向检测。氧化型硫辛酸和其氨基化合物是可以购买到的,但是利用简单的步骤就可使其还原。硫辛酸和其氨基化合物都可作为底物,有氨基存在,此酶的活性要强 5 倍。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 实验所需「试剂」具体见「其他」 0.96 ml 实验混合物 0.02 ml 0.2 mol/L DL-二氢硫辛酰胺 4.0 mol/L 0.02 ml 酶样品 开始加入 0.01 ml 0.1 mmol/L H2O2 溶液 30℃ 时,于 340 nm 处吸收值发生变化,ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。 展开 |
注意事项 | |
其他 | 试剂: 0.1 mol/L 磷酸钾,pH7.5 0.1 mol/L NAD(游离酸,Mr=663.4;663 mg 溶于 10 ml 水中) 0.1 mol/L DTE(二硫赤藓糖醇,Mr=154.2;或二硫苏糖醇,DTT,Mr=154.2;154 mg 溶于 10 ml 水中) 0.2 mol/L DL-二氢硫辛酰胺(Mr=207.3;52 mg 溶于 1.25 ml 乙醇或者丙酮。原料溶液浓度的二氢硫辛酰胺不可溶于水中,而且不可溶于酒精。存在醇脱氢酶时,例如天然的乙醇可以与 NAD 反应形成乙醛和 NADH,因此必须排除这个酶的活性,若两者选一,底物必须溶解于丙酮溶液中)。 展开 |