实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
实验步骤 | 实验所需「试剂」具体见「其他」 0.98 ml 实验混合物 0.02 ml 酶样品 30 ℃ 培养 15 min,加入 0.1 ml 1 mol/L HCl 停止,沸水浴 5 min。而后 0.4 ml 的测定用量溶于 0.2 ml 2 mol/L 羟胺,并且室温下持续 10 min 后加入0.6 ml FeCl3 试剂。离心 5 min后测量 546 nm 吸收值。 展开 |
注意事项 | |
其他 | 试剂: 0.1 mol/L Tris-HCl,pH 7.6 0.01 mol/L CoA(游离酸,Mr=767.5,CoA·Li3,Mr=785.4;23 mg 溶于 3 ml 水中) 1 mol/L 乙酰磷酸(LiK 盐,Mr=184.1;1.84 mg 溶于 10 ml 水中) 磷酸转乙酰酶(乙酰-CoA:正磷酸转乙酰酶,4000 U/ml) 0.2 mol/L DL-二氢硫辛酰胺 1 mol/L HCl 2 mol/L 羟胺(等量的 4 mol/L 羟胺,Mr=69.49 和 4 mol/L KOH,Mr=56.11混合) FeCl3 试剂 100 ml 5% FeCl3(8.33 g FeCl3·6H2O,Mr=270.3,用 0.1 mol/L HCl 补充至 100 ml) 100 ml 12% TCA(三氯乙酸,Mr=163.4) 100 ml 3mol/l HCl(1:3 的比例混合 HCl 和 H2O) 将三种溶液混合 展开 |