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在含甘油的缓冲液中通过组装/解聚分离微管

2019.4.03
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zhaochenxu

致力于为分析测试行业奉献终身
实验材料

脑组织

试剂、试剂盒

PME 缓冲液

仪器、耗材

匀浆器

实验步骤

1. 拿到脑组织（小牛或奶牛），以每克组织 0.75 ml PME 的比例进行匀浆。

2. 匀浆物在 4℃ 以 100000 g 离心 45 分钟。

3. 转移上清并用等体积 PME-G 稀释。上清在 37℃ 温育 30~40 分钟。

4. 在 25℃ 以 100000 g 离心 45 分钟收集微管。

5. 弃掉上清，将紧密成团的微管沉淀物从管底刮下来，加最初匀浆时所用体积 1/4 的 PME，用 Dounce 的匀浆器轻轻打碎沉淀物。

6. 溶液在冰/水混合物中冰浴 30 分钟使微管解聚；在 4℃ 以 100000 g 离心 45 分钟去掉所有在冰冷的液体中不溶的聚合物。

7. 重复步骤 3 和 4 来重组装微管（含微管蛋白和微管相关蛋白），在沉淀物上铺足量含 4 mol/L 甘油的（即 PME 和 PME-G 的比例为 1：1 ) PME 缓冲液，贮存以备后用，缓冲液的量是在直着拿管子时正好盖住沉淀物。

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