一、实验材料准备
ALBPc nuPnu 裸鼠20,雌性,4~6 周龄,体重18~20 gSPF 级条件下饲养。 二、裸鼠皮下移植瘤的建立和传代
1. 收集体外培养的SGC27901 细胞,使细胞含量为5 ×107/mL ,取0.4 mL 腹腔注入,当腹水形成明显时取腹水细胞培养,然后调整细胞含量至5 ×107/mL。
2. 取0.2 mL 注入另一只裸鼠背部皮下,当皮下移植瘤长至直径1 cm左右时取出移植瘤,将瘤组织切成约1~2 mm 的小块,经18 号套管针送至另一只鼠皮下,做鼠间传代共5 代 。 三、原位移植模型的建立 1. 将传代鼠脱颈处死,无菌操作,从背部皮下剥取肿瘤组织,剔除纤维包膜,切开选取生长良好的鱼肉状的瘤组织,切成1mm ×1 mm ×1 mm 的小块,置于生理盐水中备用。
2. 腹腔注射40 mg/kg 体重的0.1 %的异戊巴比妥钠麻醉裸鼠,常规皮肤消毒,沿左侧腹部正中旁线切开,切口约1.5 cm ,小心暴露腹膜、胃壁,用一次性注射针头轻微损伤胃大弯中部浆肌层,以出血为度。
3. 取7 只裸鼠,将2~3 块肿瘤组织用医用OB 吻合胶粘合在胃壁破损处,另外7 只裸鼠,将2~3 块肿瘤组织用丰联生物蛋白胶粘合在胃壁破损处(图1 ,见彩插3。) ,待胶干后,分别用4 - 0 号线缝合腹膜、腹壁,关腹。
四、处死动物及移植瘤的观察
1. 定时观察所有裸鼠全身状况、运动情况、腹部体征。
2. 当荷瘤鼠出现明显消瘦、弓背、精神萎靡等衰竭体征时,脱颈处死解剖,取原位瘤、胸腹腔脏器和肿大淋巴结,收取腹水。
3. 所取标本经10 %甲醛固定,石蜡包埋、切片、HE 染色,做组织病理学检查。
五、统计学分析
用SPSS 10.0 统计软件,定性资料间的比较采用χ2 检验,定量资料间的比较采用t检验。 展开 |